Wrodzony zespół defektów neutrofilów związany z mutacjami w VPS45 AD 9

Transfekowane fibroblasty VPS45 migrowały znacznie szybciej w kierunku zranionego obszaru niż komórki transfekowane pustym plazmidem. Panel C pokazuje apoptozę, ocenianą przez barwienie aktywowanej kaspazy 3, w fibroblastach pacjentów transfekowanych pustym wektorem lub wektorem zawierającym niezmutowane cDNA VPS45, w porównaniu z kontrolnymi fibroblastami transfekowanymi pustym wektorem. Transfekcja niezmutowanym wektorem VPS45 zmniejszyła apoptozę o 50%. W przypadku przejściowej transfekcji zmutowanych fibroblastów plazmidem zawierającym niezmutowane cDNA VPS45, poziomy białek oddziałujących z VPS45 rabenosyn-5 (Figura 3A) i syntaksyna-16 (nie pokazane) wróciły do normy. Ponadto, podczas testów na zarysowanie, transfekowane VPS45 fibroblasty z Pacjenta B-II-9 migrowały znacznie szybciej w kierunku obszaru zranienia niż komórki od pacjenta, które były transfekowane pustym plazmidem (Figura 3B). Transfekcja niezmutowanym wektorem VPS45 zmniejszyła ilość apoptozy fibroblastów o 50%, ale nie do poziomów obserwowanych w normalnych fibroblastach transfekowanych pustym wektorem (Figura 3C). Jednakże, biorąc pod uwagę, że wydajność transfekcji wynosiła w przybliżeniu 70%, korekcja fenotypu apoptotycznego w fibroblastach od pacjenta była prawie zakończona.
Powalenie ekspresji VPS45 w embrionach danio zebranych
Ryc. 4. Ryc. 4. Ukierunkowane uderzenie Vps45 za pomocą oligonukleotydów morfolinowych (MO), które blokują łączenie i tłumaczenie w zarodkach danio pręgowanego. Panel A jest schematem projektu morfolinowego pokazującym vSE45 danio pręgowanego i strategie antysensownego morfolino do blokowania translacji matrycowego RNA informacyjnego vPS45 danio pręgowanego (ATG-MO) lub miejsca akceptorowego składania eksonu 3 (I2E3-MO). Primery F i R walidują pominięcie egzonu, w tym spodziewaną wielkość amplikonów, które wynikają z utraty eksonu 3. Poniżej przedstawiono schematyczny obraz splicowanego transkryptu w zarodkach z iniekcją I2E3-MO (258 bp) w porównaniu z nieinjekulowanym oraz zarodki z iniekcją ATG-MO (359 par zasad). W panelu B, górna immunoblotka pokazuje wyniki analizy odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy transkryptu vps45 z niezaszczepionych i wstrzykniętych morfoliny zarodków 5 dni po zapłodnieniu. Dolna immunoblot przedstawia wyniki analizy Western blot lizatów pełnych białek z nie wstrzykniętych i zniesionych morfoliny zarodków 5 dni po zapłodnieniu. Lizaty z zarodków, którym wstrzyknięto ATG-MO i z tych, którym wstrzyknięto I2E3-MO wykazują wyraźną redukcję vps45 po znormalizowaniu z .-aktyną, która była stosowana jako kontrola obciążenia białkiem. W panelu C hybrydyzacja in situ zarodków 5 dni po zapłodnieniu podtrzymuje funkcjonalne znoszenie vps45
[więcej w: stomatolog bielsko biała, anatomia palpacyjna, implanty zielona góra ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: anatomia palpacyjna implanty zielona góra stomatolog bielsko biała