Wrodzony zespół defektów neutrofilów związany z mutacjami w VPS45 AD 10

Przedstawiono reprezentatywne obrazy zarodków pryszczyca (z lewej), zarodków z ATG-MO (w środku) i zarodków z I2E3-MO (po prawej). Przedstawiono wyniki hybrydyzacji in situ na całej górze z użyciem sondy RNA znakowanej digoksygeniną przeciwko mieloperoksydazie danio pręgowanej. Mieloperoksydaza wykrywa neutrofile w tkance hematopoetycznej (prostokącie). W niezaszczepionych zarodkach sygnały mieloperoksydazy są łatwo widoczne (groty strzałek). Jednak w zarodkach z iniekcją ATG-MO i wstrzykniętym I2E3-MO obserwuje się wyraźne zmniejszenie wybarwienia mieloperoksydazy, co sugeruje zmniejszenie liczby dojrzałych krwinek białych obojętnochłonnych. Funkcję VPS45 badano in vivo z użyciem zarodków danio pręgowanego wstrzykniętych jednym z dwóch specyficznych dla vps45 oligo- nukleotydów morfolinowych (MO) (I2E3-MO, skierowanych na miejsce akceptorowe splicingu intronu 2, lub ATG-MO, kierującego na miejsce inicjacji translacji) (Figura 4A). Optymalna dawka każdego morfoliny została określona przez jej toksyczny wpływ na wstrzyknięte zarodki 24 godziny po zapłodnieniu (ryc. S10 w Dodatku uzupełniającym); nie zaobserwowano widocznych wad morfologicznych. Analiza ilościowa PCR w czasie rzeczywistym wstrzykniętych zarodków wykazała, że I2E3-MO powodowało pomijanie egzonu 3, co skutkowało przesunięciem ramki i przedwczesnym skróceniem białka. Immunoblotting potwierdził obniżony poziom białka dla obu MO (Figura 4B). W porównaniu z nietraktowanymi zarodkami, zarodki leczone morfolino vps45 miały duży spadek liczby neutrofilów, ocenianych za pomocą barwienia mieloperoksydazą24 (Figura 4C) i barwienia Sudan czerni B18 (ryc. S11 w Dodatku Uzupełniającym).
Dyskusja
Zidentyfikowaliśmy pięcioro dzieci w czterech rodzinach, które miały tę samą homozygotyczną mutację (p.Thr224Asn) w VPS45 i dwoje dzieci w jednej rodzinie, którzy mieli inną mutację homozygotyczną (p.Glu238Lys) w VPS45. Tych siedmiu dzieci miało nową chorobę charakteryzującą się głównie neutropenią i dysfunkcją neutrofilów, brakiem odpowiedzi na G-CSF, zagrażającymi życiu zakażeniami, zwłóknieniem szpiku kostnego i hematopoezą pozaszpikową nerek. Brak cech dysmorficznych, takich jak albinizm lub niski wzrost, odróżnia ten zespół od innych znanych zespołów związanych z neutropenią, takich jak zespół Chédiaka-Higashi, zespół Griscelli ego typu 2, zespół Hermansky ego-Pudlaka typu 2 i niedobór p14. , 26 Zaburzenia neurologiczne, w tym opóźnienia rozwojowe, u dwóch chorych dzieci z rodziny marokańskiej mogą odzwierciedlać różnice w mutacji VPS45 lub obecność innej wady genetycznej w tym spokrewnionym rodowodzie.
Wykazano, że mutacje VPS45 powodują tę chorobę na podstawie następujących ustaleń: w pełni oddzielone od choroby, nieobecne w 250 allelach prawidłowych grup kontrolnych o takim samym podłożu genetycznym i w opublikowanych bazach danych, spowodowały zmiany strukturalne w VPS45 i były znajdujące się w pozostałościach wysoce zakonserwowanych wśród gatunków
[podobne: stomatolog, program stomatologiczny, stomatolog płock ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: program stomatologiczny stomatolog stomatolog płock